De estirpe judía (llegó a ser rabino antes de su conversión), Zamora fue el primer profesor de hebreo de la Universidad de Salamanca, siendo un profundo erudito de las lenguas clásicas hebrea, aramea, griega y latina. Será uno de los integrantes del equipo de trabajo que reunió el Cardenal Cisneros en Alcalá de Henares para la composición de la Biblia Políglota Complutense. De los seis libros de que está compuesta la Biblia Políglota, el sexto, que contiene un diccionario hebreo y arameo del Antiguo Testamento, una traducción de los nombres hebreos y arameos, un índice de las palabras latinas y una gramática hebrea, es obra enteramente de Zamora. Además de su aportación a la Biblia Políglota, Alfonso de Zamora compuso una Introducción a la gramática hebrea, un Diccionario hebreo y un Tratado de Ortografía hebrea; también traducirá al latín el Antiguo Testamento de forma interlineal, de manera que a cada palabra hebrea corresponda la latina superpuesta.